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细胞必须要这么操作吗 ?看看技术怎么说

人阅读 发布时间:2019-12-10 10:51

细胞培养从原理上来说并不复杂,所需设备也比较简单,但它仍是一份需要耐心的工作。针对不同细胞,培养时需根据细胞特性选择不同的包被液,消化液等。

对于培养贴壁能力较弱的细胞或原代细胞时,为了促进细胞贴壁需要对培养瓶、培养皿等耗材进行包被处理。目前 sciencell 最主要的包被液有多聚赖氨酸 (Poly-L-Lysine, Cat. #0403 or Cat. #0413)、牛血浆纤维粘连蛋白(Bovine Plasma Fibronectin,Cat. #8248)、0.2% 的明胶溶液(0.2% Gelatin Solution,Cat. #0423)。

 

多聚赖氨酸是一种合成化合物,是带正电荷的氨基酸,通过改变培养基质表面的电极来促进细胞贴壁。除了促进细胞贴壁生长,包被液多聚赖氨酸包被后能提高原代细胞的存活率和促进神经突长出。ScienCell 公司多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine, Cat. #0403 or #0413)分子量 70 - 150 kDa,推荐以 2 ug/cm2 的浓度包被培养瓶,37℃ 孵箱 1 小时或 4℃ 冰箱过夜。人口腔角质细胞(Cat. #2610)等需用多聚赖氨酸进行包被,以促进细胞贴壁。ScienCell 公司的包被液牛血浆纤维粘连蛋白(Bovine Plasma Fibronectin, Cat. #8248)使用亲和色谱法提纯自牛血浆,是促进细胞贴壁和延伸生长的理想基质。人主动脉内皮细胞(Cat. #6100)、人脐静脉内皮细胞(Cat. #8000)等细胞,纤维粘连蛋白分子量 440-500kDa 的糖蛋白,存在于细胞表面蛋白和血浆中,它可与细胞膜表面受体和细胞外基质成分结合。明胶是来自于胶原的高分子量水溶蛋白混合物,sciencell 公司 0.2% 的明胶溶液(0.2% Gelatin Solution, Cat. #0423)用于包被培养器皿以促进细胞贴壁,推荐用于分化的人胚胎干细胞,某些原代细胞和永生化细胞。不管是原代细胞还是细胞系,如果想达到最佳效果请根据细胞类型进行选择。
 

细胞传代过程中消化是至关重要的,不同的细胞对应的消化液不同,快来看看中乔新舟强势推出的胰酶吧!

sciencell 公司原代细胞传代时需要使用 0.05% 胰酶消化液 ( 0.05%Trypsin/EDTA Solution,Cat. #0183)或者可用 DPBS 对 0.25% 胰酶消化液 ( 0.25%Trypsin/EDTA Solution,Cat. #0103)稀释后使用。对于细胞系通常使用 0.25% 胰酶溶液进行消化,但是有些细胞对胰酶作用比较敏感,例如:HK-2 人肾上皮细胞 、MCF 10A 人乳腺细胞等,推荐使用 0.05% 胰酶消化,以减小胰酶对细胞的作用。

 

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,最大限度的保存细胞活力是我们冻存细胞的一致目标。目前细胞冻存多采用二甲基亚砜(DMSO)作保护剂,这种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。

复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。强烈推荐 sciencell 有血清冻存液(Cat. #0133) 和无血清的冻存液(Cat. #0143),小规格(50 ml/瓶)包装,减少分装步骤。

解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的培养瓶中直接进行培养,24 小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液,以去除 DMSO,减少离心和重悬对细胞的损伤,使用起来更加方便。

 

良好的操作习惯,恰到好处的试剂才能保证细胞良好的状态。科研路上,中乔新舟与您同行!


 

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